连日风雨交加,杜丽娘在春香的侍奉下,病情愈发严重。从伤春起病直至深秋,今夕恰逢中秋,风雨依旧,杜丽娘的病情却更沉重了。她询问春香今夕何夕,得知是中秋后,让春香开窗看月色,感叹命运弄人,满心疼痛与无奈。春香为宽慰她,谎称月亮升起,杜丽娘望着月亮,悲叹自己命薄,预感今夜便是大限。
这时,杜丽娘冷厥过去,老夫人匆匆赶来。杜丽娘苏醒后,哭着向母亲拜别,称是天命难违,还提出死后葬在花园的梅树之下,因为自己钟情那株梅树,觉得自己无法像月中嫦娥般长生,只能以粉骷髅身葬于梅花古洞。老夫人悲痛万分,决定为她广做道场。
杜丽娘又叮嘱春香,要小心侍奉老爷和夫人,还让春香把自己画的春容藏在太湖石底,期望日后能被知心人发现。春香提议她若能好起来,就禀明老爷招选个秀才,同生同死,杜丽娘却觉得自己等不到那一天了,还让春香在她死后常向灵位前叫唤自己。
之后,杜丽娘再度昏过去,杜宝和老夫人赶来。杜丽娘醒来后,请求父亲扶她去中堂,感叹怕撑不过今夜风雨,渴望能有重生的机会。最终,杜丽娘因病伤春离世,春香悲痛大哭,回忆着与杜丽娘相处的点点滴滴。石道姑赶来,与春香一同回忆往昔。老夫人哭得肝肠寸断,一度闷倒。
此时,院公前来禀报杜宝升职,吏部奉圣旨升杜宝为安抚使,镇守淮扬,即刻启程。杜宝因女儿遗言,决定将她葬在后园梅树之下,还吩咐割取后园建梅花庵观,安置女儿神位,由石道姑焚修看守,陈最良协助照顾,并拨漏泽院二顷虚田作为祭田。陈最良提及旧规的诸生遗爱记和生祠碑文,石道姑一番误解,引发小争执,杜宝表示旧规一概不用,只希望清明寒食有人能给女儿坟前浇一碗饭 。